Análisis genético de los marcadores de virulencia de Mycobacterium tuberculosis pks15/1 y plcD en cepas candidatas de alta transmisibilidad y en aislados implicados en infección policlonal.
María Alonso Martínez1, Darío García de Viedma1, Noelia Alonso Rodríguez1, Sandra Andrés1 Ratón, Fernando Chaves2, Jesús Iñigo3, Mª Jesús Ruiz Serrano1, Emilio Bouza1.
1Hospital Gregorio Marañón, 2Hospital Doce de Octubre, 3Consejería de Sanidad y Consumo

Objetivos: 1) Evaluar si el análisis genético de los marcadores pks15/1 y plcD permite identificar cepas de alta transmisibilidad de MTB, diferentes a Beijing y 2) Analizar si en aislados implicados en infecciones policlonales de un mismo paciente existe diversidad en la composición genética de pks15/1 y plcD.

Material y métodos: Para el estudio se incluyeron 7 aislados Beijing, 22 aislados de MTB candidatos de alta transmisibilidad (representantes de los 11 clusters de mayor prevalencia en Madrid; 8-27 representantes), 10 aislados candidatos de baja transmisibilidad (cepas huérfanas) y 16 aislados implicados en infecciones policlonales de 8 pacientes. Los patrones genotípicos (RFLPtipos y spoligotipos) se analizaron con el programa Bionumerics 4.0 (Applied Maths). Los genes pks 15/1 y plcD se amplificaron mediante PCR, y se secuenciaron (pks15/1) o se caracterizó su presencia y tamaño en electroforesis (plcD).

Resultados: La secuencia del gen pks15/1 únicamente se localizó intacta en los aislados Beijing. En todos los demás aislados analizados, incluyendo los representantes de clusters de alta prevalencia, se detectó una deleción que potencialmente impide la síntesis de PGL. En cuanto al análisis genético de plcD, la mayor parte de los aislados mostraron alteraciones en el gen (plcD-), tanto las cepas candidatas de alta prevalencia/transmisibilidad (77.3%) como las cepas huérfanas (60%). Con respecto a los pacientes con infección policlonal, la mayoría de las cepas (62.5%) presentó el gen plcD intacto. En tres de los ocho casos, ambos aislados lo presentaron intacto (plcD+/plcD+), y en 4 casos, las cepas que coinfectaban a un mismo individuo mostraban diversidad en la composición del gen (plcD-/plcD+).

Conclusiones: La presencia de la secuencia intacta del gen pks15/1 es un marcador de virulencia de la familia Beijing, no identificándose en otros aislados de MTB. El análisis de mutaciones en el gen plcD demostró una alta frecuencia de alteraciones, que impide discriminar entre candidatos de diferente transmisibilidad. Los aislados implicados en infección policlonal mostraron i) con mayor frecuencia el gen plcD intacto y ii) diversidad en la composición genética de plcD.

Financiación: Fondo de Investigaciones Sanitarias (02/0882, 02/0572, 03/0654).